环境科学研究  2018, Vol. 31 Issue (8): 1464-1470  DOI: 10.13198/j.issn.1001-6929.2018.03.28

引用本文  

刘瑀, 娄亚迪, 李颖, 等. 密闭培养对纤细角毛藻稳定同位素组成的影响[J]. 环境科学研究, 2018, 31(8): 1464-1470.
LIU Yu, LOU Yadi, LI Ying, et al. Effects of Closed Culture on the Stable Isotopic Composition of Chaetoceros gracilis[J]. Research of Environmental Sciences, 2018, 31(8): 1464-1470.

基金项目

国家科技支撑计划项目(No.2015BAD17B05);中央高校基本科研业务费专项(No.3132016332)
National Key Technology Research and Development Program of the Ministry of Science and Technology of China (No.2015BAD17B05); Fundamental Research Funds for the Central Universities of China (No.3132016332)

作者简介

刘瑀(1965-), 男, 陕西西安人, 教授, 博士, 主要从事海洋环境化学研究, ylsibo@foxmail.com

文章历史

收稿日期:2017-12-13
修订日期:2018-03-01
密闭培养对纤细角毛藻稳定同位素组成的影响
刘瑀1 , 娄亚迪1 , 李颖2 , 王海霞2     
1. 大连海事大学环境科学与工程学院, 辽宁 大连 116026;
2. 大连海事大学航海学院, 辽宁 大连 116026
摘要:为研究碳源对赤潮藻生长的影响,以赤潮藻纤细角毛藻(Chaetoceros gracilis)为研究对象,在密闭条件下进行培养,模拟赤潮发生时碳源缺乏的生长环境;分析碳源不足对纤细角毛藻不同生长阶段的差异影响,采用密闭培养的方法,分别在正常组和缺氮组的营养条件下培养纤细角毛藻,测定生物量、营养盐浓度和碳氮稳定同位素组成等重要监测指标.结果表明:不同营养条件对纤细角毛藻的生物量存在显著影响.在正常组,c(NO3--N)(NO3--N为硝酸盐)随着培养时间呈下降趋势,ρ(NO2--N)(NO2--N为亚硝酸盐)和ρ(NH4+-N)(NH4+-N为铵盐)与藻类生物量呈显著正相关,ρ(PO43--P)(PO43--P为磷酸盐)和c(SiO42--Si)(SiO42--Si为硅酸盐)与藻类生物量呈显著负相关;在缺氮组,c(NO3--N)、ρ(NO2--N)、ρ(NH4+-N)、ρ(PO43--P)和c(SiO42--Si)均与藻类生物量呈显著负相关.整个试验周期中,正常组和缺氮组δ13C和δ15N值越来越正.其中,正常组的δ13C值比缺氮组的更正,平均高2.286‰;缺氮组的δ15N值比正常组的更正,平均高3.307‰.正常组和缺氮组的δ13C、δ15N值与生物量均呈显著正相关.研究显示,碳源和氮源的不足分别会导致更正的δ13C和δ15N值,推测赤潮发生会导致δ13C和δ15N值偏正,赤潮藻的碳氮稳定同位素组成可以作为赤潮监测的指标和方法.
关键词纤细角毛藻    赤潮    密闭培养    稳定同位素    营养盐    
Effects of Closed Culture on the Stable Isotopic Composition of Chaetoceros gracilis
LIU Yu1 , LOU Yadi1 , LI Ying2 , WANG Haixia2     
1. College of Environmental Science and Engineering, Dalian Maritime University, Dalian 116026, China;
2. College of Navigation, Dalian Maritime University, Dalian 116026, China
Abstract: Chaetoceros gracilis was cultured in a closed environment to simulate carbon source limitation during the occurrence of red tides. The microalgae were maintained under both normal nutrient conditions and nitrogen deficient conditions. Biomass, stable carbon, nitrogen isotopes and nutrient concentration were measured to determine how the two different nutrient condition affects C. gracilis growth at different growth phases. The results showed that the two different conditions produced significant differences in biomass during different growth phases. Under the normal nutrient condition, the concentration of nitrate, phosphate, and silicate decreased over time, while nitrite and ammonium increased. Under the nitrogen deficient condition, all five nutrient conditions were negatively correlated with the biomass of the algae. δ13C and δ15N values increased throughout the experiment. The δ13C value of the normal nutrient group was 2.286‰ higher than that of the nitrogen deficient group. The δ15C value of the nitrogen deficient group was 3.307‰ higher than that of the normal nutrient group. Both δ13C and δ15N values had a significant positive correlation with biomass in both groups. The occurrence of red tides resulted in higher levels of δ13C and δ15N, which could be used as an indicator of red tide events.
Keywords: Chaetoceros gracilis    red tides    closed culture    stable isotope    nutrients    

近些年来,居民生活污水、工厂工业废水排放入海量增加,海洋环境污染也在逐渐加剧.输入海洋的营养物质不断积累,沿海海域的营养物质结构发生改变,特别是PO43--P(磷酸盐)和NO3--N(硝酸盐)总量不断增加,导致我国近海海域PO43--P、NO3--N等营养盐浓度不断提高[1]. DIN(无机氮)和活性PO43--P是浮游植物生长的基本营养物质[2],氮、磷等营养物质输入量不断增加引起浮游植物生物量增加,浮游植物的呼吸作用和腐烂变质消耗海洋中氧气,导致水体溶解氧下降,同时鱼类及其他水生生物大量死亡、水生生态平衡破坏,这就是水体富营养化现象[3].富营养化和大量营养物质的输入是赤潮频繁爆发、持续时间久的主要原因[4],这对于生活在深海中的生物是毁灭性的[3, 5].这种富营养化最显著影响就是改变了食物链,导致浮游植物大量生长,最终爆发赤潮[6].我国也已经成为一个赤潮频发的国家[7].

营养盐是海洋浮游植物生长所必需成分,浮游植物生长会受到海水中某种营养盐含量的影响.单细胞藻类是引起海洋赤潮现象的主要生物[8].微藻爆发式生长与水体中的氮关系密切[9].某些生物地球化学机制表明海洋河口相对于淡水湖更容易出现氮限制的情况[10].海水中,大量阴离子与磷竞争吸附点,最终磷从微粒中解吸,成为生物可利用物质[11-13].微藻不但是海洋生态系统中主要初级生产力,而且也是海洋食物链中最基础的环节.王睿喆等[14]研究了营养盐输入对水体中磷形态的转化以及浮游藻类生长的影响.岳冬梅等[15]研究了营养盐补充后对铜绿微囊藻的生长情况.某些少硅化的有害硅藻可以引起有害藻类的爆发并越来越得到重视,与无害硅藻相比它们在吸收氮、磷等营养物质方面竞争较少[6].

营养盐含量会影响藻细胞的生化组成,进而改变赤潮藻类稳定同位素组成[16].应用稳定同位素技术示踪赤潮主要种的发展变化,可以对赤潮的产生机理、发展过程、消失原因和对水体及生态系统各营养层次的影响进行研究,并且能够对赤潮加以预防等[17]. Street等[18]利用稳定同位素技术研究了赤潮发生后生态系统相应的变化.俞志明[19]研究了海链藻在不同氮源下的同位素分馏情况.赤潮的爆发会造成海洋微藻生长所需碳源受到限制,同时海洋微藻的稳定同位素值也会发生改变.

该研究在密闭环境下进行,空气中的CO2无法进入培养环境中,实验室模拟赤潮爆发时藻类生长碳源不足的情况.试验分别在正常营养盐(正常组)和缺氮营养盐(缺氮组)的条件下培养纤细角毛藻,测定生物量、营养盐浓度和碳氮稳定同位素等监测指标,探讨了碳源不足对纤细角毛藻碳、氮稳定同位素组成的影响,以及不同营养条件对纤细角毛藻不同生长阶段的影响,希望赤潮藻的稳定同位素组成可以作为赤潮监测的指标和方法,为预报和治理赤潮提供参考.

1 材料与方法 1.1 试验藻种及培养

所用藻种纤细角毛藻(Chaetoceros gracilis),硅藻属,由大连海洋大学提供.

培养方法:海水取自于大连黑石礁附近海域,经过滤灭菌后使用,加入改良的Conway营养液[15]和维生素[15],接入藻种,在SPX-GB-300型恒温光照培养箱中培养,光照强度为60 μmol/(m2·s),温度为(20±0.1)℃, 光暗周期为12 h :12 h, 每天摇动培养瓶4次,防止藻细胞附壁或下沉[20].

1.2 藻种密度及生长率测定方法

采用浮游植物计数框法对藻细胞进行计数,同时利用可见分光光度计测定培养液的吸光度(波长692.5 nm),绘制吸光度和细胞数目的标准曲线及细胞生长曲线.

1.3 稳定同位素组成分析及营养盐浓度测定

样品经450 ℃灼烧的Whatman GF/F玻璃纤维滤膜抽滤,60 ℃条件烘干24 h,用于稳定同位素组成测定.所得样品经元素分析仪和稳定同位素比质谱仪测定其δ13C和δ15N值,稳定碳、氮同位素的自然丰度表示为

$ X = [({R_{{\rm{sa}}}}/{R_{{\rm{st}}}}) - 1] \times 1\;000‰ $

式中,Xδ13C或δ15N,Rsa为待测样品的13C/12C或15N/14N,Rst标准品的13C/12C或15N/14N. δ13C值是相对于PDB标准的自然丰度,δ15N值是相对于空气中氮气的丰度. δ13C、δ15N的分析精度分别为±0.10‰、±0.20‰.

NO3--N、NO2--N、NH4+-N、PO43--P和SiO42--Si 5种营养盐浓度测定方法参见《海洋化学调查技术规程》[21].

1.4 仪器和设备

元素分析仪,Flash EA 1112,Thermo-Fisher公司,美国;稳定同位素比质谱仪,Delta V Advantage Isotope Ratio MS,Thermo-Fisher公司,美国;显微镜(OLYMPUS),CX21FXS1型,奥林巴斯(中国)有限公司;可见分光光度计,721型,上海元析仪器有限公司;水浴恒温振荡器锅,THZ-82型,顺华仪器有限公司.

1.5 数据处理方法

用SPSS 20.0统计软件对数据进行分析处理,差异性比较用单因素方差分析方法,显著性设置为P<0.05;相关性分析采用皮尔逊法.

1.6 藻种培养方法

培养适量纤细角毛藻培养液正常组和缺氮组2组,试验藻种培养基采用改良的Conway营养液[15],硝酸钠是该培养基的主要氮源,此外还含有极少量的钼酸铵.正常组加入正常的Conway营养液和维生素,缺氮组加入缺氮营养盐和维生素,缺氮组的培养基中不含有硝酸钠.至纤细角毛藻生物量达到105 mL-1后,将2组培养液各分装到20个容积为500 mL的具塞锥形瓶中,每个具塞锥形瓶中培养液的体积为480 mL.将塞子扭紧后再用封口膜进行密封以确保在试验过程中没有外界CO2进入到培养环境中.试验持续20 d,每天在同一时间分别从2组试验组各取1瓶培养液,其中一部分培养液用于测定藻密度,剩余培养液经过0.22 μm的玻璃纤维滤膜过滤,滤膜烘干保存用于测定碳、氮稳定同位素组成,滤液用于测定培养液中各营养盐浓度,试验做3组平行.

每天使用的培养液都是处于密闭培养下的,取样完成后剩余的培养液不再留至第2天,可以保证取样过程不会对碳源产生影响,试验使用的培养基是不含有任何含碳物质的,同样可以保证不会对碳源产生影响.当pH>8.35时,水溶液中没有CO2存在,试验期间每天对培养液的pH进行检测,pH已经超过8.35,因此可以保证试验满足碳源不足的条件.

2 结果与分析 2.1 纤细角毛藻的生长情况

纤细角毛藻在正常组、缺氮组的生长曲线如图 1所示.比生长速率计算结果显示,正常组纤细角毛藻1~11 d处于指数生长期,12~20 d处于稳定期;缺氮组1~8 d处于指数生长期,9~20 d处于稳定期.缺氮组的生长较正常组快,正常营养盐培养下纤细角毛藻的最大生物量为(1.87×106±0.03×106)mL-1,缺氮组为(1.69×106±0.02×106)mL-1.对2组纤细角毛藻指数期和稳定期的生物量进行单因素方差分析,结果表明,整个试验周期中,不同营养条件对纤细角毛藻各生长时期生物量影响存在显著性差异(P<0.05).

图 1 不同培养条件下纤细角毛藻的生长曲线 Fig.1 The growth curve of C. gracilis under different culture conditions
2.2 营养盐浓度的变化

图 2可以看出,正常组在前3 d培养液中的c(NO3--N)急剧下降,藻细胞对NO3--N的吸收处于高峰时期,从第4天开始培养液中的c(NO3--N)处于较稳定状态,变化不大.缺氮组由于培养液中c(NO3--N)很低,所以整个试验过程中c(NO3--N)都明显低于正常组.在前8 d纤细角毛藻的生长处于指数生长期时,培养液中的c(NO3--N)急剧下降,之后趋于零直至试验结束.由相关性分析(见表 1)可知,缺氮组c(NO3--N)与纤细角毛藻生物量之间呈显著负相关.由图 3可见,正常组培养液中ρ(NO2--N)在指数期大幅上升,缺氮组则逐渐下降.由相关性分析(见表 1)可知,正常组ρ(NO2--N)与生物量之间呈显著正相关,缺氮组则呈显著负相关.

图 2 培养液中c(NO3--N)的变化情况 Fig.2 Variance of NO3--N in culture solution under two culture conditions with C. gracilis

表 1 不同营养条件营养盐含量与生物量相关性分析 Table 1 Correlation analysis of nutrients and biomass of different nutrient conditions

图 3 培养液中ρ(NO2--N)的变化情况 Fig.3 Variance of NO2--N in culture solution under two culture conditions with C. gracilis

当藻细胞内的NH4+-N高于自身生长的需求时,会有一部分释放到培养液中,造成培养液中ρ(NH4+-N)上升.如图 4所示,正常组在指数期ρ(NH4+-N)上升较快,进入稳定期后,藻细胞生长稳定,ρ(NH4+-N)也趋于稳定.缺氮组由于氮源较少,藻细胞会吸收利用NH4+-N,因此培养液中ρ(NH4+-N)在逐渐下降.由相关性分析(见表 1)可知,正常组ρ(NH4+-N)与纤细角毛藻生物量之间呈显著正相关,缺氮组则呈显著负相关.

图 4 培养液中ρ(NH4+-N)的变化情况 Fig.4 Variance of NH4+-N in culture solution under two culture conditions with C. gracilis

试验所加培养基是经过改良的Conway培养基,硝酸钠是该培养基的主要氮源,缺氮组加入的培养基中不含有硝酸钠,此外培养基中还含有少量的氮源,同时海水中本身也含有一些氮源,所以缺氮组依然可以检测出c(NO3--N)、ρ(NO2--N)以及ρ(NH4+-N),但与正常组相比,c(NO3--N)、ρ(NO2--N)以及ρ(NH4+-N)大幅降低.

图 5可见,培养液中ρ(PO43--P)在指数生长期下降很快,达到稳定期后ρ(PO43--P)趋于稳定.在正常组,PO43--P消耗的速度比缺氮组快,由于正常组藻细胞对NO3--N、NO2--N和NH4+-N的消耗并不大,因此对PO43--P和SiO32--Si的吸收较多,以维持藻细胞的生长.缺氮组对NO3--N、NO2--N、NH4+-N和SiO32--Si都有需求,所以吸收PO43--P的速度较小.由相关性分析(见表 1)可知,正常组、缺氮组ρ(PO43--P)与生物量之间呈显著负相关.

图 5 培养液中ρ(PO43--P)的变化情况 Fig.5 Variance of PO43--P in culture solution under two culture conditions with C. gracilis

图 6可见,与ρ(PO43--P)的变化趋势大致相同,培养液中c(SiO32--Si)在指数生长期下降很快,在正常组培养到第10天时,培养液中的c(SiO32--Si)趋于稳定.氮、磷是海水浮游植物生长必须的营养元素,缺氮组氮源缺乏促使藻细胞对PO43--P的吸收量增加,对SiO32--Si也有消耗但消耗量较少,因此缺氮组的c(SiO32--Si)比正常组高.在缺氮组培养到稳定期时,培养液中c(SiO32--Si)也趋于稳定.由相关性分析(见表 1)可知,正常组、缺氮组c(SiO32--Si)与生物量之间呈显著负相关.

图 6 培养液中c(SiO32--Si)的变化情况 Fig.6 Variance of SiO32--Si in culture solution under two culture conditions with C. gracilis
2.3 纤细角毛藻稳定同位素组成变化情况

纤细角毛藻在正常组、缺氮组的碳氮稳定同位素组成变化如图 7所示. δ13C和δ15N值随着培养时间的增加而越来越正.

图 7 纤细角毛藻碳、氮稳定同位素组成变化 Fig.7 Stable carbon and nitrogen isotope signatures (δ13C and δ15N) of C. gracilis

正常组,纤细角毛藻在指数生长期的δ13C值为(-17.549‰±0.112‰)~(-9.365‰±0.006‰),δ15N值为(11.127‰±0.264‰)~(14.073‰±0.140‰);在稳定期的δ13C值为(-9.885‰±0.017‰)~(-6.753‰±0.149‰),δ15N值为(13.097‰±0.258‰) ~(14.104‰±0.248‰).缺氮组,纤细角毛藻在指数生长期的δ13C值为(-23.039‰±0.017‰)~ (-15.543‰±0.116‰),δ15N值为(12.924‰±0.879‰)~(16.202‰±0.059‰),在稳定期的δ13C值为(-15.869‰±0.059‰)~(-8.275‰±0.130‰),δ15N值为(16.830‰±0.743‰)~(18.747‰±0.752‰).正常组的δ13C值整体都高于缺氮组,平均高2.286‰;缺氮组的δ15N值整体高于正常组,平均高3.307‰.微藻类,δ13C的特征值通常变化范围很大,其范围是从-58.8‰~-3.6‰[22].该试验δ13C值的试验结果也在此范围内.

3 讨论 3.1 营养条件对纤细角毛藻生长的影响

赵佩佩等[23]研究发现,碳源充足时在氮限制的情况下,三角褐指藻的生长速度要比正常情况下减慢许多.该试验虽然使用的藻种不同,但都属于硅藻,因此试验前预测正常组生长的速度最快.然而,该试验结果与赵佩佩等[23]的试验结果并不相同,纤细角毛藻在正常组的生长速率较慢的,这是因为该试验是在碳源不足的条件下进行的,营养条件虽有影响,但由于大气中的CO2无法进入培养体系内,因此纤细角毛藻的生长缺少了足够的碳源,生长速率较慢,造成藻细胞生长缓慢.由于试验是在密闭的环境中培养微藻,碳源匮乏,因此正常组和缺氮组藻细胞的生长情况并没有出现正常组比缺氮组快的现象,但最大生物量仍是在正常组获得.

藻细胞不能直接利用NO3--N,而要在硝酸还原酶的作用下还原成NO2--N[24],因为图 2显示正常组c(NO3--N)下降很快,说明大量的NO3--N被还原成NO2--N,造成藻细胞中ρ(NO2--N)过大,因此一部分NO2--N会被释放到水中,导致培养液中ρ(NO2--N)上升.当NO3--N同化率较高时,细胞中积累的NO2--N就会因未被利用而释放出来[25].指数期生物量增加较快,还原的ρ(NO2--N)也在快速增加,而进入稳定期后,藻细胞生长稳定,ρ(NO2--N)也趋于稳定.在缺氮组,整个生长过程中由于氮源含量少,所以藻细胞利用的NO2--N有两部分,一部分是被藻细胞吸收的NO3--N转化而成的NO2--N,另一部分是培养液中的NO2--N,因此培养液中ρ(NO2--N)是在降低而不是上升.研究[26-27]表明,浮游植物吸收利用NH4+-N时消耗能量少,NH4+-N最容易被浮游植物利用,因此藻类利用氮源会优先利用NH4+-N. NO3--N也可以为浮游植物所利用,但NO3--N需要在酶的作用下经过一系列氧化态转变为NH4+-N才可被吸收.当藻细胞选择NH4+-N作为氮源时,藻细胞会有更多的能量用于其他生命活动[28-29].由于硅藻的细胞结构和新陈代谢与SiO32--Si的含量有着密切的关系[30],所以正常组和缺氮组培养液中c(SiO32--Si)整体上也是在逐步下降.

该试验结果与高春梅等[31]测定的海州湾海洋牧场的上覆水营养盐浓度相比,各营养盐的浓度都大幅升高,这是因为该试验是在碳源不足的环境下进行,模拟赤潮爆发时期藻类生长碳源受限的情况,因此纤细角毛藻在生长过程中所需的碳源不足,生长较慢,所以对营养盐的吸收也较少,造成了培养液中的营养盐浓度较高的现象.

3.2 碳源对纤细角毛藻稳定同位素组成的影响

微藻等浮游植物生长初期,在摄取碳、氮等营养物质的过程中由于营养条件充足会优先选择吸收较轻的12C和14N,歧视较重的13C和15N,发生同位素分馏现象.随着生物量的增加营养物质会逐渐减少,碳、氮的可用性降低,藻细胞此时被迫吸收利用较重的13C和15N,不会出现同位素分馏现象,导致δ13C和δ15N值偏正[22].藻细胞处于指数生长期时生物量较低,此时的碳、氮可用性高,会最大程度地发生同位素分馏现象;而藻细胞处于稳定期时生物量较高,此时的碳、氮可用性低,不会发生同位素分馏现象,会造成δ13C值偏正[32-33].海洋浮游植物的δ13C值一般为-21‰,但是其变化范围很大[34].

Brutemark等[32]研究表明,微藻指数生长期的δ13C值低于稳定期,与该试验的结果相同.该试验是在密闭环境中培养纤细角毛藻,外界环境中的CO2不会进入到培养环境中,造成培养环境中的碳源缺乏.正常组的δ13C值整体都高于缺氮组,平均高2.286‰.不同的无机碳来源会造成浮游植物δ13C值的变化[35].该试验中,纤细角毛藻生长刚进入指数期时,藻细胞进行光合作用所需的碳源来自于海水中游离的CO2,相对比较充足,藻细胞可以吸收较轻的12C,此时藻细胞的δ13C值并没有增加.但随着藻细胞的不断分裂增加,海水中游离的CO2不足以继续维持其生长,因此藻细胞就会利用海水中的HCO3-作为碳源,被迫吸收了较重的13C.由于藻细胞利用的碳源不同,在对数期以CO2为主要碳源,而在稳定期则是以HCO3-为主要的碳源,HCO3-δ13C值平均比游离态的CO2高7‰左右,因此才导致了在不同生长阶段δ13C值的变化,造成了δ13C值随着培养时间的增加而越来越正,所以稳定期有着更正的δ13C值.该试验是在实验室条件下模拟赤潮爆发时碳源不足的情况,推测在赤潮发生时,赤潮藻类的δ13C值会越来越正.

正常组的氮源是在试验初始时直接添加到培养液中的,因此在试验过程中氮源充足,藻细胞会优先选择较轻的14N,培养后期由于氮源减少,藻细胞利用14N的比例减少、15N的比例增加,因此造成δ15N值偏正.与正常组相比,缺氮组的氮源缺乏,藻细胞吸收的15N比例较大,所以整个试验周期缺氮组的δ15N值比正常组的δ15N值更正,平均高3.307‰.单因素方差分析结果(见表 2)表明,不同营养条件对纤细角毛藻指数期、稳定期的δ13C和δ15N值影响存在显著性差异.由相关性分析(见表 3)可知,正常组、缺氮组的δ13C和δ15N值与生物量之间均呈显著正相关.

表 2 同一生长时期不同营养条件纤细角毛藻δ13C、δ15N的方差分析 Table 2 Variance analysis of δ13C and δ15N under different nutrient conditions

表 3 不同营养条件δ13C、δ15N与生物量相关性分析 Table 3 Correlation analysis of δ13C, δ15N and biomass of different nutrient conditions
4 结论

a) 在整个试验周期中,不同营养条件对纤细角毛藻的生物量及δ13C、δ15N值的影响存在显著性差异.

b) 正常组ρ(NO2--N)、ρ(NH4+-N)与生物量之间呈显著正相关,ρ(PO43--P)、c(SiO32--Si)与生物量之间呈显著负相关;缺氮组c(NO3--N)、ρ(NO2--N)、ρ(NH4+-N)、ρ(PO43--P)和c(SiO32--Si)与生物量之间均呈显著负相关.

c) 试验周期中,δ13C和δ15N值都随时间显示出更正的值.正常组δ13C值比缺氮组δ13C值更正,平均高2.286‰;缺氮组δ15N值比正常组δ15N值更正,平均高3.307‰.正常组和缺氮组δ13C、δ15N值与生物量之间均呈显著正相关.

d) 推测赤潮的爆发会导致更正的δ13C和δ15N值,赤潮藻的碳、氮稳定同位素组成可以作为赤潮监测的指标和方法.

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